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反相色譜柱的工作原理

更新時間:2023-03-25      點擊次數(shù):3644
  反相色譜柱的介紹:
 
  根據(jù)流動相和固定相相對極性不同,液相色譜分為正相色譜和反相色譜。流動相極性大于固定相極性的情況,稱為反相色譜。非極性鍵合相色譜可作反相色譜。在現(xiàn)代液相色譜中應用廣泛,現(xiàn)代液相色譜分析工作的70%以上是在非極性鍵合固定相上進行的。
 
  反相色譜柱的原理:
 
  反相色譜是指利用非極性的反相介質為固定相,極性有機溶劑的水溶液為流動相,根據(jù)溶質極性(疏水性)的差別進行溶質分離與純化的洗脫色譜法。溶質在反相介質上的分配系數(shù)取決于溶質的疏水性,一般疏水性越大,分配系數(shù)越大。當固定相一定時,可以通過調節(jié)流動相的組成調整溶質的分配系數(shù)。由于反相介質表面為強烈疏水性,并且流動相為低極性的有機溶劑,生物活性大分子在反相色譜分離過程中容易變性失活,以回收生物活性蛋白質為目的時,應注意選用適宜的反相介質。
 
  反相色譜固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團,基于樣品中的不同組分和疏水基團之間疏水作用的不同而分離。在生物大分子分離中,多采用離子強度較低的酸性水溶液,添加一定量乙腈、異丙醇或甲醇等與水互溶的有機溶劑作為流動相。
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